Terpenoid

ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TERPENOID YANG AKTIF ANTIBAKTERI PADA HERBA MENIRAN

Ekstraksi

 Dua cara yaitu :

1.      Sokletasi

Seberat 1000 g serbuk kering herba meniran disokletasi dengan 5 L pelarut n – heksana. Ekstrak  n -heksana dipekatkan lalu disabunkan dalam 50 mL KOH 10%. Ekstrak n-heksana dikentalkan lalu diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri.

2.      Maserasi

Seberat 1000 g serbuk kering herba meniran dimaserasi menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol dipekatkan lalu dihidrolisis dalam 100 mL HCl 4 M. Hasil hidrolisis diekstraksi dengan 5 x 50 mL n – heksana. Ekstrak n-heksana dipekatkan lalu disabunkan dalam 10 mL KOH 10%. Ekstrak n-heksana dikentalkan lalu diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri.

Uji aktivitas antibakteri

Ekstrak n-heksanaa diuji aktivitasnya terhadap bakteri Eschericia colidan Staphyloccocus aureus dengan tahap– tahap sebagai berikut :

1.      Diambil sebanyak satu koloni biakan bakteri Eschericia coli dengan menggunkan jarum ose yang  dilakukan secara aseptis.

2.      Dimasukkan ke dalam tabung yang berisi 2 mL Mueller-Hinton broth kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35ºC .

3.      Suspensi bakteri homogen yang telah diinkubasi siap dioleskan pada permukaan media Mueller Hinton agar, secara merata dengan menggunakan lidi kapas yang steril.

4.      Kemudian ditempelkan disk yang berisi sampel, standar tetrasiklin serta pelarutnya

(n-heksana) yang digunakan sebagai kontrol.

5.      Lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35ºC

6.      Dilakukan pengukuran daya hambat zat terhadap bakteri.7.

7.      Untuk biakan bakteri Staphyloccocus aureus dilakukan dengan cara yang sama sepertibiakan bakteri Eschericia coli, namun suhunya berbeda yaitu pada suhu 37ºC.

Ekstrak yang positif terpenoid dan paling aktif antibakteri dipisahkan mengunakan kromatografi kolom dengan fase diam silika gel 60 dan fase gerak kloroform : metanol (3:7).Fraksi-fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri. Fraksi yang positif terpenoid dan paling aktif antibakteri dilanjutkan ke tahap

1.pemurnian menggunakan kromatograi lapis tipis.

2.Isolat yang relatif murni selanjutnya diidentifikasi menggunakan kromatogafi gas–spektroskopi massa

HASIL DAN PEMBAHASAN 

Hasil ekstraksi dengan cara sokletasi dan maserasi menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana pada kedua cara tersebut positif mengandung senyawa terpenoid. Hal ini dibuktikan dengan terbentuknya warna ungu setelah ekstrak n-heksana direaksikan dengan Pereaksi Lieberman Burchard. Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap ekstrak n-heksana hasil sokletasi memberikan daya hambat yang lebih besar dibandingkan ekstrak n-heksana hasil maserasi.Terhadap ekstrak n-heksana hasil sokletasi dipisahkan mengunakan kromatografi kolom menghasilkan tiga buah fraksi yang dipaparkan pada Tabel 1

no	fraksi	Jumlah noda	Rf	Warna ekstrak
1	A (1-27)	1	0,725	Kuning
2	B(28-33)	2	0,690 dan 0,600	Kuning muda
3	C (34-)	1	0,580	kuning

Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa fraksi A dan fraksi C positif terpenoid yaitumemberikan warna merah muda (positif diterpenoid) pada fraksi A dan warna ungu muda(positif triterpenoid) pada fraksi C setelah direaksikan dengan pereksi Lieberman-Burchard.

Nama fraksi	Warna larutansebelum direaksikandengan pereaksiLieberman-Burchard	Warna larutansesudah direaksikandengan pereaksiLieberman- Burchard	Keterangan
Fraksi A	Kuning muda	Merah muda	Positif terpenoid (diterpenoid)
Fraksi B	Kuning muda	Hijau kebiruan	Negatif terpenoid (steroid)
Fraksi C	Kuning	Ungu muda	Positif terpenoid (triterpenoid)

Reagen Lieberman Burchard ini biasa digunakan untuk mengidentifikasi secarakualitatif suatu kolesterol. Biasanya reagen Lieberman Burchard digunakan dengan caramenyemprotkan larutannya pada kolesterol yang sudah di-kromatografi-kan (TLC). Apabilamengandung Triterpenoid, maka akan memberikan warna merah sedangkan apabila mengandung Steroid, akan memberikan warna biru dan hijau. Reagen Lieberman Burchard dibuat dari Asam sulfat pekat (10 mL) dan Anhidrida Asetat (10 mL). Metanol dan Etanol dapat digunakan untuk melarutkan sampel yang akan diidentifikasi.

http://www.scribd.com/doc/90054376/jurnal-terpenoid