Rabu, 31 Oktober 2012

Terpenoid


ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TERPENOID YANG AKTIF ANTIBAKTERI PADA HERBA MENIRAN
Ekstraksi
 Dua cara yaitu :
1.      Sokletasi
Seberat 1000 g serbuk kering herba meniran disokletasi dengan 5 L pelarut n – heksana. Ekstrak  n -heksana dipekatkan lalu disabunkan dalam 50 mL KOH 10%. Ekstrak n-heksana dikentalkan lalu diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri.
2.      Maserasi
Seberat 1000 g serbuk kering herba meniran dimaserasi menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol dipekatkan lalu dihidrolisis dalam 100 mL HCl 4 M. Hasil hidrolisis diekstraksi dengan 5 x 50 mL n – heksana. Ekstrak n-heksana dipekatkan lalu disabunkan dalam 10 mL KOH 10%. Ekstrak n-heksana dikentalkan lalu diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri.


Uji aktivitas antibakteri
Ekstrak n-heksanaa diuji aktivitasnya terhadap bakteri Eschericia colidan Staphyloccocus aureus dengan tahap– tahap sebagai berikut :

1.      Diambil sebanyak satu koloni biakan bakteri Eschericia coli dengan menggunkan jarum ose yang  dilakukan secara aseptis.
2.      Dimasukkan ke dalam tabung yang berisi 2 mL Mueller-Hinton broth kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35ºC .
3.      Suspensi bakteri homogen yang telah diinkubasi siap dioleskan pada permukaan media Mueller Hinton agar, secara merata dengan menggunakan lidi kapas yang steril.
4.      Kemudian ditempelkan disk yang berisi sampel, standar tetrasiklin serta pelarutnya
(n-heksana) yang digunakan sebagai kontrol.
5.      Lalu diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35ºC
6.      Dilakukan pengukuran daya hambat zat terhadap bakteri.7.
7.      Untuk biakan bakteri Staphyloccocus aureus dilakukan dengan cara yang sama sepertibiakan bakteri Eschericia coli, namun suhunya berbeda yaitu pada suhu 37ºC.

Ekstrak yang positif terpenoid dan paling aktif antibakteri dipisahkan mengunakan kromatografi kolom dengan fase diam silika gel 60 dan fase gerak kloroform : metanol (3:7).Fraksi-fraksi yang diperoleh dari kromatografi kolom diuji fitokimia dan uji aktivitas antibakteri. Fraksi yang positif terpenoid dan paling aktif antibakteri dilanjutkan ke tahap

1.pemurnian menggunakan kromatograi lapis tipis.
2.Isolat yang relatif murni selanjutnya diidentifikasi menggunakan kromatogafi gas–spektroskopi massa





HASIL DAN PEMBAHASAN 
Hasil ekstraksi dengan cara sokletasi dan maserasi menunjukkan bahwa ekstrak n-heksana pada kedua cara tersebut positif mengandung senyawa terpenoid. Hal ini dibuktikan dengan terbentuknya warna ungu setelah ekstrak n-heksana direaksikan dengan Pereaksi Lieberman Burchard. Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap ekstrak n-heksana hasil sokletasi memberikan daya hambat yang lebih besar dibandingkan ekstrak n-heksana hasil maserasi.Terhadap ekstrak n-heksana hasil sokletasi dipisahkan mengunakan kromatografi kolom menghasilkan tiga buah fraksi yang dipaparkan pada Tabel 1

no
fraksi
Jumlah noda
Rf
Warna ekstrak
1
A (1-27)
1
0,725
Kuning
2
B(28-33)
2
0,690 dan 0,600
Kuning muda
3
C (34-)
1
0,580
kuning

Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa fraksi A dan fraksi C positif terpenoid yaitumemberikan warna merah muda (positif diterpenoid) pada fraksi A dan warna ungu muda(positif triterpenoid) pada fraksi C setelah direaksikan dengan pereksi Lieberman-Burchard.

Nama fraksi
Warna larutansebelum direaksikandengan pereaksiLieberman-Burchard
Warna larutansesudah direaksikandengan pereaksiLieberman- Burchard
Keterangan
Fraksi A
Kuning muda
Merah muda
Positif terpenoid (diterpenoid)
Fraksi B
Kuning muda
Hijau kebiruan
Negatif terpenoid (steroid)
Fraksi C
Kuning
Ungu muda
Positif terpenoid (triterpenoid)


Reagen Lieberman Burchard ini biasa digunakan untuk mengidentifikasi secarakualitatif suatu kolesterol. Biasanya reagen Lieberman Burchard digunakan dengan caramenyemprotkan larutannya pada kolesterol yang sudah di-kromatografi-kan (TLC). Apabilamengandung Triterpenoid, maka akan memberikan warna merah sedangkan apabila mengandung Steroid, akan memberikan warna biru dan hijau. Reagen Lieberman Burchard dibuat dari Asam sulfat pekat (10 mL) dan Anhidrida Asetat (10 mL). Metanol dan Etanol dapat digunakan untuk melarutkan sampel yang akan diidentifikasi.

Selasa, 16 Oktober 2012

STEROID


Isolasi Senyawa Steroid Dari Daun Tapak Liman

Dalam penelitian ini ekstraksi steroid secara sokletasi dari 500 gram daun tapak liman dengan menggunakan pelarut n-heksana sehingga diperoleh ekstak n-heksana dan ampas. Ekstrak n-heksana yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan cara menguapkan pelarutnya, sehingga didapatkan ekstrak pekat yang berbentuk pasta sebanyak 5 gram. Setelah diperoleh ekstrak pekat maka dilanjutkan dengan uji spesifik steroid  menggunakan pereaksi Lieberman Burchard dan memberikan uji positif yang ditandai dengan terbentuknya warna biru. Terhadap ekstrak pekat ini dilakukan kromotografi lapis tipis untuk mendapatkan kondisi pemisahan steroid dari komponen kimia lainnya.
Uji kromotografi lapis tipis dengan berbagai eluen menunjukan bahwa pemisahan komponen kimia yang terkandung dalam ekstrak n-heksana relative baik dengan eluen n-heksana –etil asesat (8:2). Hal ini sesuai dengan system yang disarankan untuk pemisahan steroid (harborne, 1987). Kromatografi lapis tipis dari ekstrak pekat ini diperoleh 4 noda yang terpisah dengan baik dengan Rf:0,7;0,55;0,35 dan 0,15. Selanjutnya untuk pemisahan masing-masing komponen kimia dilakukan dengan kromotografi kolom sebanyak 4 gram ekstrak pekat dengan menggunakan eluen n-heksana dan etil asetat secara elusi bergradien (Step Gradien Polarity). Hasil kromatografi kolom memberikan 14 fraksi yang dapat dilihat dari tabel 1.
Tabel 1.Hasil Kromotograpi Kolom Dari Ekstrak Pekat Daun Tapak Liman
No vial
Fraksi
Jumlah noda
Uji steroid
1-2
3-5
6-12
13
14-16
17-21
22-30
31-38
39-47
48-54
55-64
65-75
76-87
88-116
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
1
1
2
3
1
2
2
2
2
2
2
2
1
-
-
+
-
+
-
-
+
-
-
-
-
-
-
-

Hasil kromotografi kolom yang  diperoleh kemudian dimonitor dengan kromotografi lapis tipis dengan menggunakan eluen n-heksana : etil asetat (8:2) dan penampakan noda dengan menggunakan lampu ultraviolet, uap I2, dan pereaksi Lieberman burchard. Dari hasil kromotografi kolom tersebut hanya fraksi 2,4 dan 7 yang memberikan  uji positif terhadap steroid. Penguapan pelarut terhadap fraksi 2 (vial no 3-5) memberikan hasil berupa minyak, pada fraksi 4 (vial no.13) berupa padatan berwarna oranye keputihan dan memberikan 3 noda ketika dimonitor dengan kromotografi lapis tipis, sehingga
pengerjaan lebih lanjut difokuskan pada fraksi 7. Pencucian Kristal pada fraksi 7 dengan menggunakan n-heksana kemudian direkristalisasi dengan methanol, sehingga didapatkan senyawa yang murni.